Christophe HARGOUES

Dosage de micro-échantillons de sang par technique ELISA sur une plaque 96 puits. Après avoir prélevé 4 microlitres de sang sur la queue de souris éveillées, les scientifiques réalisent un dosage par ELISA de type sandwich pour détecter l'hormone de croissance (GH) dans les échantillons. Avec cette technique de dosage immunologique ultrasensible, l'hormone est piégée entre un anticorps de capture, fixé au fond des puits, et un anticorps de détection. L'ajout d'un substrat contenant un anticorps…

Micropipettes de dextrans fluorescents pour étudier, in vivo, la diffusion intra-tissulaire de l'hormone de croissance (GH) sécrétée. Les scientifiques utilisent du dextran, un sucre inerte comparable en taille à l'hormone GH, marqué avec une sonde fluorescente et injecté à un modèle murin anesthésié. Afin de précisément définir le profil de distribution de l’hormone GH sécrétée dans l'hypophyse et sa capture par les vaisseaux sanguins, l’équipe compare les injections de dextrans fluorescents…

Immobilisation de poissons-zèbres sous une goutte d’agarose pour les étudier au microscope. Les chercheurs regardent ici l’activité des cellules lors du développement du poisson, notamment la migration des neurones et la mise en place du réseau neuronal hypothalamique. Le poisson-zèbre a la caractéristique d’avoir un développement embryonnaire très rapide ainsi qu’un corps transparent. Il permet ainsi d’étudier et d’imager facilement in vivo les mécanismes cellulaires à l’œuvre, notamment le…

Dosage de micro-échantillons de sang par technique ELISA sur une plaque 96 puits. Après avoir prélevé 4 microlitres de sang sur la queue de souris éveillées, les scientifiques réalisent un dosage par ELISA de type sandwich pour détecter l'hormone de croissance (GH) dans les échantillons. Avec cette technique de dosage immunologique ultrasensible, l'hormone est piégée entre un anticorps de capture, fixé au fond des puits, et un anticorps de détection. L'ajout d'un substrat contenant un anticorps…

Installation des larves de poissons-zèbre immobilisées dans une goutte d'agarose sous un microscope multi-photonique. Cette technique permet de visualiser et d’étudier la migration des neurones hypothalamiques mais aussi les signaux calciques qui déclenchent la libération de neurohormones dans ces neurones. La microscopie à deux photons permet ensuite d’obtenir des séquences d’images et des piles d’images en 3D du tissu nerveux ou d’organes, directement en profondeur (jusqu’à 200 microns dans…

Dosage de micro-échantillons de sang par technique ELISA sur une plaque 96 puits. Après avoir prélevé 4 microlitres de sang sur la queue de souris éveillées, les scientifiques réalisent un dosage par ELISA de type sandwich pour détecter l'hormone de croissance (GH) dans les échantillons. Avec cette technique de dosage immunologique ultrasensible, l'hormone est piégée entre un anticorps de capture, fixé au fond des puits, et un anticorps de détection. L'ajout d'un substrat contenant un anticorps…

Visualisation directe in vivo de l’activité de neurones hypothalamiques de poissons-zèbres, par microscopie multi-photonique intravitale. Cette technique permet d'observer comment les cellules (signaux calciques) s’organisent dans des groupes de neurones pour migrer vers l’hypothalamus. Une fois dans ce dernier, elles libèrent leurs neurohormones qui contrôlent les sécrétions hypophysaires, comme l’hormone de croissance (GH). Ce projet a permis de mettre en lumière des éléments clé du dialogue …

Prélèvement sanguin sur un modèle murin éveillé et libre de ses mouvements. Des échantillons d’environ 4 microlitres sont prélevés régulièrement (toutes les 5 à 30 minutes) sur sa queue. Ils permettent aux scientifiques d’étudier la sécrétion de l’hormone de croissance (GH) et d’identifier les pics de sécrétion au cours de la journée. Leur but est de corréler, pour la première fois, les signaux qui déclenchent la sécrétion de l'hormone GH dans les cellules, avec les taux d'hormone GH présents…

Dosage de micro-échantillons de sang par technique ELISA sur une plaque 96 puits. Après avoir prélevé 4 microlitres de sang sur la queue de souris éveillées, les scientifiques réalisent un dosage par ELISA de type sandwich pour détecter l'hormone de croissance (GH) dans les échantillons. Avec cette technique de dosage immunologique ultrasensible, l'hormone est piégée entre un anticorps de capture, fixé au fond des puits, et un anticorps de détection. L'ajout d'un substrat contenant un anticorps…

Préparation d’une manipulation pour étudier, in vivo, la diffusion intra-tissulaire de l’hormone de croissance (GH) sécrétée. Elle est libérée dans le tissu hypophysaire avant d'être distribuée aux organes cibles par les vaisseaux sanguins. Pour reproduire ce mécanisme, les scientifiques utilisent du dextran, un sucre inerte, marqué avec une sonde fluorescente et injecté par micropipette à un modèle murin anesthésié. Cette molécule, comparable en termes de taille à l'hormone GH, mime leur…

Electrophorèse de protéines sur gel (ou "western blotting"). Cette technique de biochimie permet de détecter des protéines spécifiques extraites de cellules, comme ici les protéines TRIO et NAV1 qui ont un rôle majeur dans le développement neuronal. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience intellectuelle ou les troubles du spectre autistique, présentent des mutations du gène TRIO. Pour comprendre les mécanismes moléculaires responsables de ces troubles et…

Culture de neurones de souris porteuses de mutations du gène TRIO. Le milieu de culture est placé dans un incubateur à 37 °C et est régulièrement renouvelé avec de nouveaux nutriments pour permettre la croissance des cellules. Les manipulations sont effectuées dans des conditions stériles pour éviter leur contamination par des bactéries ou d’autres micro-organismes. Ces cellules permettront aux scientifiques d’étudier les gènes et d’analyser finement l’effet des mutations sur la morphologie de…

Observation par microscopie confocale de neurones de souris transfectés avec la protéine TRIO (porteuse de mutation). Ils ont été cultivés en laboratoire pendant 14 jours et transfectés avec cette protéine au septième jour. Les scientifiques regardent ensuite si la mutation du gène TRIO a provoqué des perturbations dans la formation des synapses, zone de contact qui permet aux neurones de communiquer entre eux. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience…

Récupération de cellules de souris en culture dans une boîte de Pétri. L’ajout d’une solution de lyse permet l’éclatement des cellules pour accéder aux protéines qui intéressent les chercheurs. En grattant la boîte de Petri ils peuvent récupérer le lysat cellulaire (résultat de leur éclatement) pour ensuite conserver les extraits de protéines dans de l’azote liquide et étudier précisément les mutations et leur effet sur la protéine TRIO. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques,…

Analyse d’une coupe de cervelet de souris porteuse de mutations du gène TRIO. Une coupe sagittale du cervelet, région située à l’arrière du crâne, permet d’analyser sa structure afin de voir les anomalies chez les souris mutantes. La coupe est colorée au crésyl violet (coloration de Nissl) qui permet de visualiser les cellules sur la coupe histologique (fine tranche observable au microscope) du cerveau. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience…

Amplification de fragments d’ADN par réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Après avoir récupéré les fragments d’ADN qui les intéressent, les scientifiques les amplifient par PCR pour détecter les souris porteuses de la mutation du gène TRIO. Cette technique permet d’obtenir de grandes quantités d’un fragment d’ADN spécifique et de longueur définie. Les produits PCR sont ensuite chargés sur gel d’agarose afin de les visualiser : leur taille indiquera si la souris est porteuse ou non de la…

Observation au microscope des cultures de neurones de souris. Les scientifiques vérifient ici l’état des cellules, c’est-à-dire si elles sont vivantes ou mortes. Ces cellules permettront aux scientifiques d’étudier les gènes et d’analyser finement l’effet des mutations responsables des troubles neurologiques sur la morphologie de la cellule. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience intellectuelle ou les troubles du spectre autistique, présentent des…

Observation par microscopie confocale de neurones de souris transfectés avec la protéine TRIO (porteuse de mutation). Ils ont été cultivés en laboratoire pendant 14 jours et transfectés avec cette protéine au septième jour. Les scientifiques regardent ensuite si la mutation du gène TRIO a provoqué des perturbations dans la formation des synapses, zone de contact qui permet aux neurones de communiquer entre eux. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience…

Récupération de cellules de souris en culture dans une boîte de Pétri. L’ajout d’une solution de lyse permet l’éclatement des cellules pour accéder aux protéines qui intéressent les chercheurs. En grattant la boîte de Petri ils peuvent récupérer le lysat cellulaire (résultat de leur éclatement) pour ensuite conserver les extraits de protéines dans de l’azote liquide et étudier précisément les mutations et leur effet sur la protéine TRIO. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques,…

Culture de neurones de souris porteuses de mutations du gène TRIO. Le milieu de culture est placé dans un incubateur à 37 °C et doit être renouvelé avec de nouveaux nutriments pour permettre la croissance des cellules. Les manipulations sont effectuées dans des conditions stériles pour éviter leur contamination par des bactéries ou d’autres micro-organismes. Ces cellules permettront aux scientifiques d’étudier les gènes et d’analyser finement l’effet des mutations sur la morphologie de la…

Mise en place d’un bain-marie à 37 °C pour réaliser une digestion enzymatique de fragments d’ADN qui ont été amplifiés par polymérisation en chaîne (PCR). Avec cette technique, le fragment d’ADN est coupé en deux uniquement s’il y a une mutation du gène TRIO. L’ADN digéré est ensuite chargé sur gel d’agarose pour séparer les fragments d’ADN en fonction de leur taille et ainsi reconnaître l’ADN muté, composé de deux petits fragments, et l’ADN normal, composé d’un seul grand fragment. Certaines…

Observation au microscope des cultures de neurones de souris. Les scientifiques vérifient ici l’état des cellules, c’est-à-dire si elles sont vivantes ou mortes. Ces cellules permettront aux scientifiques d’étudier les gènes et d’analyser finement l’effet des mutations responsables des troubles neurologiques sur la morphologie de la cellule. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience intellectuelle ou les troubles du spectre autistique, présentent des…

Observation par microscopie confocale de la formation des synapses et du prolongement de neurones (axone) de souris transfectés avec la protéine TRIO porteuse de mutation (en vert) et NAV1 (en rouge). Les scientifiques regardent le rôle de ces deux protéines dans le développement neuronal et notamment si la mutation du gène TRIO a provoqué des perturbations dans la formation des synapses, zone de contact qui permet aux neurones de communiquer entre eux. Certaines personnes atteintes de troubles…

Conservation de protéines dans de l’azote liquide. Après avoir réalisé une lyse cellulaire pour accéder aux protéines d'intérêt (TRIO et NAV1), le lysat cellulaire est récupéré et conservé dans de l’azote liquide. Cette technique permet de le congeler instantanément à -196 °C sans abîmer les protéines. Les tubes sont ensuite stockés au congélateur à -80 °C avant d’être utilisés. Les protéines contenues dans ces tubes seront analysées par électrophorèse sur gel (ou "western blotting"). Certaines…

Culture de neurones de souris porteuses de mutations du gène TRIO. Le milieu de culture est placé dans un incubateur à 37 °C et doit être renouvelé avec de nouveaux nutriments pour permettre la croissance des cellules. Les manipulations sont effectuées dans des conditions stériles pour éviter leur contamination par des bactéries ou d’autres micro-organismes. Ces cellules permettront aux scientifiques d’étudier les gènes et d’analyser finement l’effet des mutations sur la morphologie de la…

Récupération des cellules de souris en culture pour conserver les protéines d’intérêt. L’ajout d’une solution de lyse dans la boîte de pétri permet l’éclatement des cellules pour accéder aux protéines qui intéressent les chercheurs. En grattant la boîte de Petri ils peuvent récupérer le lysat cellulaire (résultat de leur éclatement) avec les protéines et conserver le tout dans de l’azote liquide afin d’étudier précisément les mutations et leur effet sur la protéine TRIO. Certaines personnes…

Observation au microscope de l’hippocampe d’une souris porteuse de mutations du gène TRIO. Les scientifiques cherchent à visualiser les anomalies présentes au niveau de cette zone du cerveau chez les souris porteuses de cette mutation. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience intellectuelle ou les troubles du spectre autistique, présentent des mutations du gène TRIO. Pour comprendre les mécanismes moléculaires responsables de ces troubles et les processus…

Electrophorèse de protéines sur gel (ou "western blotting"). Cette technique de biochimie permet de détecter des protéines spécifiques extraites de cellules, comme ici les protéines TRIO et NAV1 qui ont un rôle majeur dans le développement neuronal. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience intellectuelle ou les troubles du spectre autistique, présentent des mutations du gène TRIO. Pour comprendre les mécanismes moléculaires responsables de ces troubles et…

Culture de neurones de souris porteuses de mutations du gène TRIO. Le milieu de culture est placé dans un incubateur à 37 °C et est régulièrement renouvelé avec de nouveaux nutriments pour permettre la croissance des cellules. Les manipulations sont effectuées dans des conditions stériles pour éviter leur contamination par des bactéries ou d’autres micro-organismes. Ces cellules permettront aux scientifiques d’étudier les gènes et d’analyser finement l’effet des mutations sur la morphologie de…

Observation par microscopie confocale de neurones de souris transfectés avec la protéine TRIO (porteuse de mutation). Ils ont été cultivés en laboratoire pendant 14 jours et transfectés avec cette protéine au septième jour. Les scientifiques regardent ensuite si la mutation du gène TRIO a provoqué des perturbations dans la formation des synapses, zone de contact qui permet aux neurones de communiquer entre eux. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience…

Récupération des cellules de souris en culture pour conserver les protéines d’intérêt. L’ajout d’une solution de lyse dans la boîte de pétri permet l’éclatement des cellules pour accéder aux protéines qui intéressent les chercheurs. En grattant la boîte de Petri ils peuvent récupérer le lysat cellulaire (résultat de leur éclatement) avec les protéines et conserver le tout dans de l’azote liquide afin d’étudier précisément les mutations et leur effet sur la protéine TRIO. Certaines personnes…

Observation au microscope de l’hippocampe d’une souris porteuse de mutations du gène TRIO. Les scientifiques cherchent à visualiser les anomalies présentes au niveau de cette zone du cerveau chez les souris porteuses de cette mutation. Certaines personnes atteintes de troubles neurologiques, tels que la déficience intellectuelle ou les troubles du spectre autistique, présentent des mutations du gène TRIO. Pour comprendre les mécanismes moléculaires responsables de ces troubles et les processus…

Mesures de perméabilité de la membrane d’ultrafiltration à l’aide d’une cellule de filtration. L’objectif du projet est d’obtenir une membrane d’ultrafiltration ayant une forte perméabilité afin de minimiser le temps du procédé de purification de l’eau à traiter. Pour vérifier que la membrane obtenue respecte les caractéristiques souhaitées, le flux d’eau capable de la traverser est mesuré selon les différentes pressions appliquées (entre 0,5 et 2,5 bar). Pour cela, le passage de l’eau dans la…

Dépôt d'une solution de polymères sur un support de silicium de taille prédéfinie à l’aide d’une pipette. Le film de copolymère à blocs est généré par "coulage en bande" à l’aide d’une racle réglée à la hauteur désirée. Ce "processus de séparation de phase induite par un non solvant" (NIPS) a pour but de former un film de copolymère à blocs avec une sous-structure hautement perméable. Il est complété par une étape de "recuit sous une vapeur de solvant" (SVA) pour reconstruire la surface…

Mise en place d’un échantillon de copolymère à blocs au microscope à force atomique (AFM). Le film de copolymère à blocs avec une phase (ou forme) gyroïde créé grâce au processus de "recuit sous une vapeur de solvant" (SVA) est vérifié à l'aide de la microscopie à force atomique (AFM), pour voir si la phase est bien celle désirée. Cette technologie avancée permet d’observer, par le biais d’une pointe fine de quelques nanomètres, la surface libre des films de copolymère à blocs. L’AFM permet d…

Rangement de supports de silicium. Une fois découpés à la taille souhaitée (ici 3 x 3 cm2), les substrats de silicium sont rangés pour les protéger des poussières, avant de déposer dessus un film de copolymère à blocs. Ces substrats sont à l’origine de la création des membranes d’ultrafiltration. Pour cela, des copolymères à blocs sont utilisés : ce sont des chaînes de polymères synthétisées à partir de deux ou trois monomères chimiquement différents, et dont les blocs résultants sont capables…

Mesures de perméabilité de la membrane d’ultrafiltration à l’aide d’une cellule de filtration. L’objectif du projet est d’obtenir une membrane d’ultrafiltration ayant une forte perméabilité afin de minimiser le temps du procédé de purification de l’eau à traiter. Pour vérifier que la membrane obtenue respecte les caractéristiques souhaitées, le flux d’eau capable de la traverser est mesuré selon les différentes pressions appliquées (entre 0,5 et 2,5 bar). Pour cela, le passage de l’eau dans la…

Processus de "recuit sous une vapeur de solvant" (SVA) pour l’obtention d’un film de copolymère à blocs avec une phase (ou autrement dit, forme) gyroïde. Les copolymères à blocs sont des chaînes de polymères synthétisées à partir de deux ou trois monomères chimiquement différents, et dont les blocs résultants sont capables de s’auto-organiser à l’échelle nanométrique sous différentes phases (lamelles, cylindres, gyroïdes…). Le film de copolymères à blocs généré par la méthode du coulage en…

Réglage de la fréquence de résonance de la pointe du microscope à force atomique (AFM). L’AFM est une technologie avancée qui permet d’observer, par le biais d’une pointe fine de quelques nanomètres, la surface libre des films de copolymère à blocs. L’AFM permet d’obtenir des images en mode topographique sur lesquelles les nanocanaux sont clairement visibles. Pour cela, l’échantillon est d’abord placé dans la chambre de l’AFM, puis la zone d’étude de quelques micromètres carrés est choisie…