Cellules T naïves confinées dans des micropuits remplis de fibres de collagène

Cellules T naïves (en vert) confinées dans des micropuits (en rouge) remplis de fibres de collagène (en blanc). Leur suivi dynamique est réalisé en microscopie non linéaire. Outre l'avantage de pouvoir imager en profondeur dans les tissus, la microscopie non linéaire ou microscopie deux photons donne accès non seulement aux contrastes fluorescents par marquage des échantillons, mais également à des contrastes supplémentaires intrinsèques ne nécessitant pas de marquages. Contrairement aux techniques de microscopie de fluorescence classiques, cette technique implique l’interaction de deux ou plusieurs photons avec la matière étudiée. Ici, les cellules sont observées par contraste de fluorescence lié à l’absorption de deux photons simultanément (CellTracker Green CMFDA). Les fibres de collagène sont révélées grâce à un processus de conversion de fréquences s'opérant lors de l’interaction des photons avec la matière orientée et non centrosymétrique (génération de seconde harmonique). La génération de seconde harmonique permet d’étudier l’architecture tridimensionnelle des fibres de collagène, composant essentiel de la matrice extracellulaire, et de mesurer l’accumulation de ces fibres dans certaines pathologies. Enfin, les micropuits réalisés en PDMS (un gel de polymère), sont imagés par contraste CARS (Coherent anti-Stokes Raman Scattering), une technique permettant de détecter des composés moléculaires en ciblant des fréquences de vibrations spécifiques.