Photoconvertible fluorescent proteins for super-resolution miscroscopy

Banc optique pour la microscopie super-résolution (ou "nanoscopie"), comprenant 7 lasers de longueurs d'onde variant de 405 nm à 730 nm, qui doivent rester parfaitement alignés. La microscopie de super-résolution par localisation de molécules uniques (SMLM) repose sur l’utilisation de marqueurs fluorescents bien particuliers. Ces protéines fluorescentes sont dites photoconvertibles, leur fluorescence passe de façon irréversible du vert au rouge après illumination avec de la lumière violette…

Banc optique pour la microscopie super-résolution (ou "nanoscopie"), comprenant 7 lasers de longueurs d'onde variant de 405 nm à 730 nm, qui doivent rester parfaitement alignés. La microscopie de super-résolution par localisation de molécules uniques (SMLM) repose sur l’utilisation de marqueurs fluorescents bien particuliers. Ces protéines fluorescentes sont dites photoconvertibles, leur fluorescence passe de façon irréversible du vert au rouge après illumination avec de la lumière violette…

Étude de protéines fluorescentes par microscopie à l’échelle de la molécule unique. Ces protéines dites photoconvertibles émettent une fluorescence verte. Lorsqu'elles sont illuminées par de la lumière violette, autour de 405 nm, elles subissent une photo transformation irréversible et émettent du rouge. L'étude de leur comportement photophysique permet d'optimiser leurs conditions d’illumination, et d'améliorer leurs performances. Pour cela, des échantillons de protéines fluorescentes sont…

Contrôle manuel d'un banc optique pour la microscopie super-résolution (ou "nanoscopie"), comprenant 7 lasers de longueurs d'onde variant de 405 nm à 730 nm, qui doivent rester parfaitement alignés. La microscopie de super-résolution par localisation de molécules uniques (SMLM) repose sur l’utilisation de marqueurs fluorescents bien particuliers. Ces protéines fluorescentes sont dites photoconvertibles, leur fluorescence passe de façon irréversible du vert au rouge après illumination avec de la…

Contrôle manuel d'un banc optique pour la microscopie super-résolution (ou "nanoscopie"), comprenant 7 lasers de longueurs d'onde variant de 405 nm à 730 nm, qui doivent rester parfaitement alignés. La microscopie de super-résolution par localisation de molécules uniques (SMLM) repose sur l’utilisation de marqueurs fluorescents bien particuliers. Ces protéines fluorescentes sont dites photoconvertibles, leur fluorescence passe de façon irréversible du vert au rouge après illumination avec de la…

Étude de protéines fluorescentes par microscopie à l’échelle de la molécule unique. Ces protéines dites photoconvertibles émettent une fluorescence verte. Lorsqu'elles sont illuminées par de la lumière violette, autour de 405 nm, elles subissent une photo transformation irréversible et émettent du rouge. L'étude de leur comportement photophysique permet d'optimiser leurs conditions d’illumination, et d'améliorer leurs performances. Pour cela, des échantillons de protéines fluorescentes sont…

Étude de protéines fluorescentes par microspectrophotométrie. Un spectromètre dédié, nommé "cal(ai)²doscope", a été développé à l’Institut de Biologie Structurale de Grenoble, en collaboration avec la start-up Optic Peter. Il est capable d’enregistrer des spectres d’absorbance et de fluorescence dans la gamme UV-visible sur des échantillons très petits. Cela permet d'étudier le comportement spectroscopique des protéines fluorescentes photoconvertibles soumises à des séquences d'illumination…

Étude de protéines fluorescentes par microspectrophotométrie. Un spectromètre dédié, nommé "cal(ai)²doscope", a été développé à l’Institut de Biologie Structurale de Grenoble, en collaboration avec la start-up Optic Peter. Il est capable d’enregistrer des spectres d’absorbance et de fluorescence dans la gamme UV-visible sur des échantillons très petits. Cela permet d'étudier le comportement spectroscopique des protéines fluorescentes photoconvertibles soumises à des séquences d'illumination…

Étude de protéines fluorescentes par microspectrophotométrie. Un spectromètre dédié, nommé "cal(ai)²doscope", a été développé à l’Institut de Biologie Structurale de Grenoble, en collaboration avec la start-up Optic Peter. Il est capable d’enregistrer des spectres d’absorbance et de fluorescence dans la gamme UV-visible sur des échantillons très petits. Cela permet d'étudier le comportement spectroscopique des protéines fluorescentes photoconvertibles soumises à des séquences d'illumination…

Étude de la dynamique de protéines fluorescentes photoconvertibles par résonance magnétique nucléaire (RMN). La RMN apporte des informations complémentaires à la cristallographie, la spectroscopie UV-visible et l’imagerie de molécules uniques, notamment sur la dynamique et la structure chimique des différents états fluorescents et non fluorescents des protéines fluorescentes photoconvertibles. Ces dernières sont placées en solution dans un tube RMN, et peuvent être soumises à illumination laser…

Étude de la dynamique de protéines fluorescentes photoconvertibles par résonance magnétique nucléaire (RMN). La RMN apporte des informations complémentaires à la cristallographie, la spectroscopie UV-visible et l’imagerie de molécules uniques, notamment sur la dynamique et la structure chimique des différents états fluorescents et non fluorescents des protéines fluorescentes photoconvertibles. Ces dernières sont placées en solution dans un tube RMN, et peuvent être soumises à illumination laser…

Étude de la dynamique de protéines fluorescentes photoconvertibles par résonance magnétique nucléaire (RMN). La RMN apporte des informations complémentaires à la cristallographie, la spectroscopie UV-visible et l’imagerie de molécules uniques, notamment sur la dynamique et la structure chimique des différents états fluorescents et non fluorescents des protéines fluorescentes photoconvertibles. Ces dernières sont placées en solution dans un tube RMN, et peuvent être soumises à illumination laser…

Traitement des données de résonance magnétique nucléaire (RMN). Les méthodes de RMN multidimensionnelle développées par l'Institut de Biologie Structurale de Grenoble sont utiles pour l’étude des protéines fluorescentes photoconvertibles, par exemple pour collecter des données rapidement sous illumination laser, ou pour étudier certains aminoacides particuliers. Suite aux collectes, les données sont analysées et les signatures des protéines fluorescentes peuvent être comparées dans leurs…

Développement et cristallisation de nouveaux mutants de protéines fluorescentes. L’amélioration des protéines fluorescentes pour la microscopie super-résolution passe par le développement de mutants aux performances accrues. Le choix des mutations à réaliser peut se faire de manière rationnelle, en analysant les résultats de cristallographie et de résonance magnétique nucléaire (RMN). Néanmoins, si certaines propriétés photophysiques sont améliorées comme attendu, d’autres sont souvent…

Développement et cristallisation de nouveaux mutants de protéines fluorescentes. L’amélioration des protéines fluorescentes pour la microscopie super-résolution passe par le développement de mutants aux performances accrues. Le choix des mutations à réaliser peut se faire de manière rationnelle, en analysant les résultats de cristallographie et de résonance magnétique nucléaire (RMN). Néanmoins, si certaines propriétés photophysiques sont améliorées comme attendu, d’autres sont souvent…

Développement et cristallisation de nouveaux mutants de protéines fluorescentes. L’amélioration des protéines fluorescentes pour la microscopie super-résolution passe par le développement de mutants aux performances accrues. Le choix des mutations à réaliser peut se faire de manière rationnelle, en analysant les résultats de cristallographie et de résonance magnétique nucléaire (RMN). Néanmoins, si certaines propriétés photophysiques sont améliorées comme attendu, d’autres sont souvent…

Développement et cristallisation de nouveaux mutants de protéines fluorescentes. L’amélioration des protéines fluorescentes pour la microscopie super-résolution passe par le développement de mutants aux performances accrues. Le choix des mutations à réaliser peut se faire de manière rationnelle, en analysant les résultats de cristallographie et de résonance magnétique nucléaire (RMN). Néanmoins, si certaines propriétés photophysiques sont améliorées comme attendu, d’autres sont souvent…