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Vortex d'un échantillon de sol lors de l'extraction d'ADN pour une analyse métagénomique. Il s'agit ici de vortexer une matrice de billes avec l'échantillon de sol pour lyser les micro-organismes présents et ainsi libérer l'ADN. Cet ADN est analysé afin de déterminer la diversité et la composition des communautés bactériennes présentes dans des échantillons de sol. Ces échantillons proviennent de 160 populations naturelles d'arabette localisées dans l'ouest de la région Midi-Pyrénées. Le…

Prélèvement de surnageants lors de l'extraction d'ADN pour une analyse métagénomique. L'objectif de cette analyse est de déterminer la diversité et la composition des communautés bactériennes présentes dans des échantillons de sol. Ils proviennent de 160 populations naturelles d'arabette localisées dans l'ouest de la région Midi-Pyrénées. Le microbiote présent dans le sol est crucial pour la santé des plantes, à la fois pour la croissance et la survie des plantes. L'objectif de ce projet est d…

Transfert de protéines exprimées transitoirement chez "Nicotiana benthamiana", d'un gel d'acrylamide vers une membrane de nitrocellulose. Ici, le plant de tabac "Nicotiana benthamiana" sert "d'usine" à fabriquer les protéines d'intérêt. Une fois produites, les protéines sont extraites, purifiées, puis visualisées sur un western par immunodétection (migration des protéines sur un gel d'acrylamide, transfert de ces dernières sur une membrane de nitrocellulose et immunodétection). Les…

Gel d'acrylamide placé dans un tampon de transfert. Il s'agit de la première étape du transfert de protéines d'un plant de tabac, "Nicotiana benthamiana", du gel d'acrylamide vers la membrane de nitrocellulose. Le plant de tabac sert "d'usine" à fabriquer les protéines d'intérêt. Les scientifiques étudient ainsi les interactions plantes-microorganismes, au niveau protéique.

Elimination des bulles d'air entre le gel d'acrylamide et la membrane de nitrocellulose. Il s'agit de la 1ère étape d'un transfert de protéines exprimées transitoirement chez "Nicotiana benthamiana", d'un gel d'acrylamide vers une membrane de nitrocellulose. Le plant de tabac "Nicotiana benthamiana" sert "d'usine" à fabriquer des protéines d'intérêt. Une fois produites, les protéines sont extraites, purifiées, puis visualisées sur un western par immunodétection (migration des protéines sur un…

Elimination du gel d'acrylamide après le transfert de protéines. Le marqueur de poids moléculaire, visible sur la membrane, est le signe que les protéines ont été correctement transférées. Il s'agit ici d'un transfert de protéines exprimées transitoirement chez "Nicotiana benthamiana", d'un gel d'acrylamide vers une membrane de nitrocellulose. Le plant de tabac "Nicotiana benthamiana" sert "d'usine" à fabriquer des protéines d'intérêt. Une fois produites, les protéines sont extraites, purifiées…

Coloration au rouge Ponceau des protéines totales extraites d'un plant de tabac. Cette manipulation a lieu après le transfert des protéines d'un gel d'acrylamide vers une membrane de nitrocellulose. Elle permet de contrôler la quantité de protéines déposées sur le gel et présentes sur la membrane. Ici, la membrane est incubée avec le colorant. Le plant de tabac sert "d'usine" à fabriquer des protéines d'intérêt. Une fois produites, les protéines sont extraites, purifiées, puis visualisées sur…

Rinçage de la membrane de nitrocellulose après coloration des protéines totales au rouge Ponceau. Sur cette membrane, des protéines extraites d'un plant de tabac "Nicotiana benthamiana" ont été transférées. Cette coloration permet de contrôler la quantité de protéines présentes sur la membrane. Le plant de tabac "Nicotiana benthamiana" sert "d'usine" à fabriquer des protéines d'intérêt. Une fois produites, les protéines sont extraites, purifiées, puis visualisées sur un western par…

Membrane de nitrocellulose révélant les protéines totales extraites d'un plant de tabac "Nicotiana benthamiana" et colorées au rouge Ponceau. Cette coloration permet de contrôler la quantité de protéines présentes sur la membrane. Le plant de tabac "Nicotiana benthamiana" sert "d'usine" à fabriquer des protéines d'intérêt. Une fois produites, les protéines sont extraites, purifiées, puis visualisées sur un western par immunodétection (migration des protéines sur un gel d'acrylamide, transfert…

Infiltration à l’aide d’une seringue, d'une culture liquide d'"Agrobacterium tumefaciens" dans les cellules de feuilles de tabac "Nicotiana benthamiana". "A. tumefaciens" est une bactérie du sol parcouru par les racines de plantes. Elle est utilisée comme un outil de transfert du matériel génétique, c'est-à-dire qu'elle peut transférer dans la cellule végétale un fragment d’ADN défini. Pour ce faire, les scientifiques introduisent au préalable l'ADN qui code la protéine qu'ils souhaitent…

Infiltration à l’aide d’une seringue, d'une culture liquide d'"Agrobacterium tumefaciens" dans les cellules de feuilles de tabac "Nicotiana benthamiana". "A. tumefaciens" est une bactérie du sol parcouru par les racines de plantes. Elle est utilisée comme un outil de transfert du matériel génétique, c'est-à-dire qu'elle peut transférer dans la cellule végétale un fragment d’ADN défini. Pour ce faire, les scientifiques introduisent au préalable l'ADN qui code la protéine qu'ils souhaitent…

Délimitation de la zone de la feuille de "Nicotiana benthamiana" infiltrée par la bactérie "Agrobacterium tumefaciens". La zone infiltrée est délimitée afin de repérer la partie exacte de la feuille qui a été en contact avec la bactérie. En effet, certaines protéines produites suite à l’infiltration avec "A. tumefaciens", provoquent une mort cellulaire localisée. Cette mort des cellules foliaires a pour rôle de limiter la propagation du pathogène, qui meurt à son tour. La plante résiste donc à…

Observation de la bactérie "Agrobacterium tumefaciens" après culture sur milieu gélosé et en milieu liquide. Pour assurer la conservation des souches bactériennes étudiées, les bactéries sont stockées à l’état latent dans un congélateur à -80 °C, en présence de glycérol. Il est possible de réactiver leur croissance en les transférant sur une boîte de Petri contenant le milieu de culture gélosé adapté. Chaque bactérie se multiplie pour former une colonie bactérienne qui est ensuite transférée…

Phénotypage de plants d'"Arabidopsis thaliana" infectés par la bactérie phytopathogène "Ralstonia solanacearum". Le symptôme caractéristique de la maladie causée par cette bactérie est le flétrissement irréversible de la plante. L’intensité des symptômes et leur vitesse d’apparition sont fonction de l’hôte (âge, espèce et cultivar), du potentiel d’inoculum (qualité, quantité) et des conditions environnementales (température, humidité, type de sol...). Le phénotypage est l'analyse du…

Phénotypage de plants d'"Arabidopsis thaliana" infectés par la bactérie phytopathogène "Ralstonia solanacearum". Le symptôme caractéristique de la maladie causée par cette bactérie est le flétrissement irréversible de la plante. L’intensité des symptômes et leur vitesse d’apparition sont fonction de l’hôte (âge, espèce et cultivar), du potentiel d’inoculum (qualité, quantité) et des conditions environnementales (température, humidité, type de sol...). Le phénotypage est l'analyse du…

Préparation de cultures bactériennes pour étalement à l'aide d'un spiraleur. Ces bactéries "Ralstonia solanacearum" proviennent d'une plante d'"Arabidopsis thaliana" où elles ont été préalablement inoculées. Cette bactérie phytopathogène colonise la plante hôte et cause son flétrissement irréversible. Ici, les bactéries récupérées par écrasement de la plante infectée sont étalées sur une boîte de culture à l'aide d'un appareil, le spiraleur, afin de pouvoir quantifier le nombre de bactéries…

Dilution du broyage d'arabette des dames, "Arabidopsis thaliana". Cette plante est écrasée dans le but de récupérer puis quantifier le nombre de bactéries "Ralstonia solanacearum" qui l'ont infectée. A cause du grand nombre de bactéries présentes dans la plante après infection, la dilution facilite la quantification et donc le dénombrement des bactéries. Cette bactérie phytopathogène colonise la plante hôte et cause son flétrissement irréversible.

Observation de phénotypes d’auto-immunité (mort cellulaire) chez des plantules d’arabette des dames, "Arabidopsis thaliana". La mort cellulaire est une réponse immunitaire mise en place chez les plantes pour contrer le développement des pathogènes dans les tissus. Elle est mise en place suite à l’activation de récepteurs immunitaires intracellulaires. Pour étudier la fonction de ces récepteurs, il est possible de contrôler leur activation et l’induction de la mort cellulaire grâce à des…

Observation du développement de plantules d’arabette des dames sauvage, "Arabidopsis thaliana" (en bas), ou contenant une construction génétique inductible permettant d’activer une réponse auto-immune, ou mort cellulaire (en haut). Cette observation se fait sur des milieux inductible (boîte de gauche) et non inductible (boîte de droite). La mort cellulaire est une réponse immunitaire des plantes pour contrer le développement des pathogènes dans les tissus. Elle est mise en place suite à l…

Prélèvement d'un échantillon de feuille de tabac "Nicotiana benthamiana" pour son observation au microscope confocal en vue d'une expérience de FRET-FLIM. Le FRET-FLIM est la combinaison du transfert d’énergie par résonance Förster (FRET) à de la microscopie d'imagerie à durée de vie par fluorescence (FLIM). La durée de vie de fluorescence d'un fluorophore (FLT) est un paramètre qui peut mettre en évidence des différences dans l'environnement entourant la protéine qui y est accrochée. Parmi ces…

Échantillon de tabac "Nicotiana benthamiana" mis sur une lame pour son observation au microscope confocal en vue d'une expérience de FRET-FLIM. Le FRET-FLIM est la combinaison du transfert d’énergie par résonance Förster (FRET) à de la microscopie d'imagerie à durée de vie par fluorescence (FLIM). La durée de vie de fluorescence d'un fluorophore (FLT) est un paramètre qui peut mettre en évidence des différences dans l'environnement entourant la protéine qui y est accrochée. Parmi ces…

Prélèvement d'un échantillon de feuille de tabac "Nicotiana benthamiana" pour son observation au microscope confocal en vue d'une expérience de FRET-FLIM. Le FRET-FLIM est la combinaison du transfert d’énergie par résonance Förster (FRET) à de la microscopie d'imagerie à durée de vie par fluorescence (FLIM). La durée de vie de fluorescence d'un fluorophore (FLT) est un paramètre qui peut mettre en évidence des différences dans l'environnement entourant la protéine qui y est accrochée. Parmi ces…

Observation au microscope confocal d'un échantillon de feuille de tabac "Nicotiana benthamiana" en vue d'une expérience de FRET-FLIM. Le FRET-FLIM est la combinaison du transfert d’énergie par résonance Förster (FRET) à de la microscopie d'imagerie à durée de vie par fluorescence (FLIM). La durée de vie de fluorescence d'un fluorophore (FLT) est un paramètre qui peut mettre en évidence des différences dans l'environnement entourant la protéine qui y est accrochée. Parmi ces différences, on peut…

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression.

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression.

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression. Pour cela, une enzyme Taq polymérase est utilisée. Elle est purifiée à partir de bactéries et est conservée à -20 °C. Le temps de la manipulation, elle doit donc être maintenue sur de la glace.

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression.

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression.

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression.

Réalisation d'un clonage par la méthode golden gate, ou assemblage de fragments d'ADN. Cette méthode permet d'assembler facilement plusieurs fragments d'ADN (gènes, régions régulatrices...) afin de tester leur rôle dans des plantes transgéniques.

Réalisation d'un clonage par la méthode golden gate, ou assemblage de fragments d'ADN. Cette méthode permet d'assembler facilement plusieurs fragments d'ADN (gènes, régions régulatrices...) afin de tester leur rôle dans des plantes transgéniques.

Observation de l'ADN obtenu après lyse de la bactérie "Escherichia coli".

Réalisation d'un clonage par la méthode golden gate, ou assemblage de fragments d'ADN obtenus après lyse de la bactérie "Escherichia coli". Cette méthode permet d'assembler facilement plusieurs fragments d'ADN (gènes, régions régulatrices...) afin de tester leur rôle dans des plantes transgéniques.

Réalisation d'un clonage par la méthode golden gate, ou assemblage de fragments d'ADN obtenus après lyse de la bactérie "Escherichia coli". Cette méthode permet d'assembler facilement plusieurs fragments d'ADN (gènes, régions régulatrices...) afin de tester leur rôle dans des plantes transgéniques.

Observation de la pousse de bactéries "Escherichia coli" portant un ADN introduit par électroporation. Chaque numéro sur la boîte de Petri correspond à un clone, c'est-à-dire une bactérie transformée avec un ADN introduit dans son génome.

Transformation racinaire de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", cultivée in vitro. Cette plante légumineuse interagit avec les bactéries rhizobia du sol. Ces interactions mènent à la formation de nodules racinaires qui hébergent les bactéries, et permettent à la plante d’acquérir l'azote, un nutriment essentiel pour leur croissance. En agriculture, cela représente un intérêt particulier pour réduire les apports d'engrais azotés.

Transformation racinaire de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", cultivée in vitro. Cette plante légumineuse interagit avec les bactéries rhizobia du sol. Ces interactions mènent à la formation de nodules racinaires qui hébergent les bactéries, et permettent à la plante d’acquérir l'azote, un nutriment essentiel pour leur croissance. En agriculture, cela représente un intérêt particulier pour réduire les apports d'engrais azotés.

Transformation racinaire de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", cultivée in vitro. Cette plante légumineuse interagit avec les bactéries rhizobia du sol. Ces interactions mènent à la formation de nodules racinaires qui hébergent les bactéries, et permettent à la plante d’acquérir l'azote, un nutriment essentiel pour leur croissance. En agriculture, cela représente un intérêt particulier pour réduire les apports d'engrais azotés.

Transformation racinaire de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", cultivée in vitro. Cette plante légumineuse interagit avec les bactéries rhizobia du sol. Ces interactions mènent à la formation de nodules racinaires qui hébergent les bactéries, et permettent à la plante d’acquérir l'azote, un nutriment essentiel pour leur croissance. En agriculture, cela représente un intérêt particulier pour réduire les apports d'engrais azotés.

Racines de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", colonisées par des bactéries du sol collectivement appelées rhizobia. Ici, les bactéries sont visualisées en bleu suite à une réaction histochimique, qui révèle l'activité d'une enzyme bactérienne (β galactosidase).

Prélèvement de disques foliaires de "Nicotiana benthamiana" après infiltration par des bactéries appelées "Agrobacterium tumefaciens". Ces bactéries, utilisées comme outils de transfert de matériel génétique, permettent l'étude de l'expression de gènes d'intérêt dans les cellules végétales.

Prélèvement de disques foliaires de "Nicotiana benthamiana" après infiltration par des bactéries appelées "Agrobacterium tumefaciens". Ces bactéries, utilisées comme outils de transfert de matériel génétique, permettent l'étude de l'expression de gènes d'intérêt dans les cellules végétales.

Transfert de jeunes plantes de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", en conditions stériles. Le transfert est nécessaire pour passer les plantes d'un milieu de croissance (après germination) vers un milieu et un dispositif adaptés pour l'inoculation par les bactéries rhizobia du sol. Ce nouveau milieu est aussi adapté aux observations en microscopie suivant l'inoculation.

Transfert de jeunes plantes de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", en conditions stériles. Le transfert est nécessaire pour passer les plantes d'un milieu de croissance (après germination) vers un milieu et un dispositif adaptés pour l'inoculation par les bactéries rhizobia du sol. Ce nouveau milieu est aussi adapté aux observations en microscopie suivant l'inoculation.

Préparation d'un dispositif de culture spécifique pour la microscopie in vivo, les racines ont été recouvertes d'un peu d'eau et un film est placé dessus. Les jeunes plantes de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", ont été transférées en conditions stériles et disposées sur un nouveau milieu dans une boîte carrée. Le transfert est nécessaire pour passer les plantes d'un milieu de croissance (après germination) vers un milieu et un dispositif adaptés pour l'inoculation par les bactéries…

Préparation d'un dispositif de culture spécifique pour la microscopie in vivo. Des jeunes plantes de luzerne tronquée, "Medicago truncatula" ont été transférées dedans. Les racines ont été recouvertes d'un peu d'eau et d'un film. Ici, le geste correspond à l'élimination du surplus d'eau de la boîte. Ce milieu est adapté pour l'inoculation par les bactéries rhizobia du sol et les observations en microscopie suivant cette inoculation.

Observation microscopique de coupes de racines de luzerne tronquée, "Medicago truncatula" colonisées par la bactérie symbiotique "Sinorhizobium meliloti". Il s'agit ici d'observer les étapes initiales de la colonisation racinaires des plantes, qui se fait à partir des poils absorbants des racines.

Préparation de lames pour l'observation microscopique de racines de luzerne tronquée, "Medicago truncatula", colonisées par la bactérie symbiotique "Sinorhizobium meliloti". Les cercles marquent l'endroit précis où les coupes de racines ont été placées sur la lame.

Réalisation d'une amplification d'ADN génomique par la technique de PCR (Polymerase chain reaction). Le but est de cloner des gènes de plante pour en étudier la fonction et le profil d'expression.