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Préparation de lamelles de cultures de cellules exprimant des protéines virales d'intérêt (ex : protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite C) pour l'examen en microscopie à fluorescence. Dépôt du milieu de montage juste avant d'examiner les cellules au microscope.

Analyse d'échantillons de plasmides bactériens par une technique de PCR (Polymerase Chain Reaction), préparation des échantillons pour leur analyse par électrophorèse en gel d'agarose. L'analyse par PCR permet de vérifier qu'une séquence donnée est bien insérée dans les plasmides analysés. Les produits de PCR sont ensuite analysés par électrophorèse en gel d'agarose.

Préparation de cultures de cellules exprimant des protéines virales d'intérêt (ex : protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite C) pour l'analyse en immunofluorescence. Montage des lamelles contenant les cellules après fixation au paraformaldéhyde, incubation en présence d'un anticorps monoclonal spécifique de la protéine virale et révélation à l'aide d'un anticorps secondaire couplé à la rhodamine.

Electrophorèse d'ADN en gel d'agarose. Analyse d'un électrophorégramme permettant de vérifier qu'une séquence donnée est bien insérée dans les plasmides analysés. Les fragments d'ADN digérés sont séparés en fonction de leur taille.

Préparation de cultures de cellules exprimant des protéines virales d'intérêt (ex : protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite C) pour l'analyse en immunofluorescence. Les cellules exprimant les protéines d'intérêt ont été fixées au paraformaldéhyde et sont incubées en présence d'un anticorps monoclonal spécifique de la protéine virale.

Les plasmides contenant les gènes des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite C sont stockées, à -20°c dans des boites de rangement. Les modifications de leurs fonctions seront analysées ultérieurement après avoir introduit des mutations.

Electrophorèse d'ADN en gel d'agarose. Analyse d'un électrophorégramme permettant de vérifier qu'une séquence donnée est bien insérée dans les plasmides analysés. Les fragments d'ADN digérés sont séparés en fonction de leur taille.

Analyse par une technique d'immunofluorescence de la localisation cellulaire de protéines virales d'intérêt (ex : protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite C) exprimées en culture cellulaire. Les cellules exprimant les protéines d'intérêt, ont été fixées au paraformaldéhyde, incubées en présence d'un anticorps monoclonal murin spécifique de la protéine virale, et révélées à l'aide d'un anticorps anti-souris couplé à la rhodamine.

Sous une hotte à flux laminaire, extraction d'ARN d'un réplicon du virus de l'hépatite C (unité minimale de réplication génomique autonome) d'une lignée cellulaire d'origine hépatocytaire, en vue d'analyser l'apparition de mutations adaptatives du réplicon à la culture cellulaire.

Les plasmides contenant les gènes des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite C sont stockées, à -20°c dans un congélateur. Les modifications de leurs fonctions seront analysées ultérieurement, après avoir introduit des mutations.

Incubation au bain-marie de réactions de digestion, à l'aide d'enzymes de restriction, de plasmides bactériens contenant des séquences de gènes viraux d'intérêt. Ces digestions permettent de vérifier qu'une séquence donnée est bien insérée dans le plasmide. Ce dernier est ensuite transfecté dans des lignées cellulaires animales pour analyser l'expression de la protéine insérée.

Electrophorèse d'ADN en gel d'agarose. Dépôt de réactions de digestion enzymatique de plasmides bactériens dans les puits d'un gel d'agarose, en vue de séparer les fragments d'ADN digérés en fonction de leur taille. Ces digestions permettent de vérifier qu'une séquence donnée est bien insérée dans le plasmide. Ce dernier est ensuite transfecté dans des lignées cellulaires animales pour analyser l'expression de la protéine insérée.